預染marker的具體要求
更新時間:2017-05-17 點擊次數(shù):2409
預染marker通常細胞增殖實驗每孔加 3000 個細胞,細胞毒性實驗每孔加入 6000 個細胞。具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定。37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)或按照實驗具體需要進行培養(yǎng),一般培養(yǎng) 6~24h。按照實驗具體要求,給予 0~20ml 干預藥物處理,37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。
預染marker分子量范圍 – 10 種蛋白分子量范圍在10 到170kDa 之間。易于使用 – 與上樣緩沖液預先混合,可直接凝膠上樣,無需煮沸。條帶清晰 – 亮度類似,但顏色不同的條帶便于觀察。質(zhì)量檢測 – 每批次均經(jīng)過SDS-PAGE 和Western blotting 驗證。兩個參考條帶 – 70kDa 為橙色,10kDa 為綠色。與膜兼容 – Western blotting 時彩色條帶將轉(zhuǎn)移到膜上應用,監(jiān)測SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳期間蛋白的遷移。監(jiān)測Western blotting 蛋白轉(zhuǎn)移到膜上的情況。測定SDS 聚丙烯酰胺凝膠和Western blots 上的蛋白分子量。
預染marker細胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生長期,常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細胞(懸浮細胞無需消化)。低速離心,收集細胞沉淀。用培養(yǎng)液重懸細胞沉淀,制備成單細胞懸液,并計數(shù)。細胞接種于96孔培養(yǎng)板,一般接種密度為3000~10000個細胞/孔。