特應(yīng)性皮炎（AD）是一種以表皮屏障受損、Th2偏倚炎癥與瘙癢為核心特征的慢性復(fù)發(fā)性皮膚病。本文整合常用AD動(dòng)物模型（MC903、HDM、OVA、OXA、DCNB及遺傳/自發(fā)模型）與人源三維皮膚/類器官模型（RHE/FTSE、皮膚-on-chip、hiPSC皮膚類器官）的造模SOP、用劑、時(shí)間窗與讀出指標(biāo)要點(diǎn)等，以便快速落地于藥效學(xué)篩選、機(jī)制驗(yàn)證與跨模態(tài)對(duì)照。

1、背景與研究意義

? AD的核心機(jī)制包括表皮屏障缺陷（如FLG/CLDN1下降）、角質(zhì)細(xì)胞來(lái)源報(bào)警素（TSLP/IL33）、Th2優(yōu)勢(shì)炎癥（IL4/IL13）以及微生物定植和超抗原加重，慢性期可見Th1/Th17參與 [1–3]。

? 針對(duì)不同科學(xué)問題（屏障—免疫互作、環(huán)境變應(yīng)原觸發(fā)、神經(jīng)-瘙癢軸、微生物加重、遺傳易感）選擇合適模型與讀出，對(duì)藥效學(xué)與機(jī)制研究至關(guān)重要 [1–4]。

2、模型選型與應(yīng)用場(chǎng)景

?快速藥篩、TSLP/Th2軸：MC903外用7–14天，穩(wěn)定誘導(dǎo)TSLP/Th2炎癥 [1,2]；

?環(huán)境變應(yīng)原與IgE：HDM經(jīng)皮貼敷2–4周，可合并輕度屏障破壞；可加SEB模擬急性加重 [3,12–13]；

?抗原特異性應(yīng)答：OVA致敏+表皮激發(fā)，建立特異性IgE/IgG1與皮膚炎癥 [4]；

?慢性復(fù)發(fā)與免疫演替：OXA、DNCB反復(fù)挑戰(zhàn)3–5周，苔蘚樣增厚明顯 [5][14]；

?遺傳易感與自發(fā)病程：Nc/Nga、flaky tail（Tmem79/Flg缺陷）等 [6–7]；

?人源機(jī)制與篩藥：RHE/FTSE + IL4/IL13/HDM/SEB，或類器官/onchip [8–12]。

3、動(dòng)物模型SOP

3.1 MC903（calcipotriol）（abs820222）急性AD樣皮炎模型

原理：維生素D類似物激活角質(zhì)細(xì)胞，強(qiáng)誘導(dǎo)TSLP，驅(qū)動(dòng)Th2炎癥與瘙癢 [1–2]。

動(dòng)物：C57BL/6或BALB/c，6–12周齡，雌雄均可。

關(guān)鍵試劑與材料

?MC903（溶劑：乙醇或乙醇:丙二醇=7:3）；無(wú)菌棉簽/微量加樣器；

?檢測(cè)：卡尺、TEWL儀、ELISA、流式/免疫組化。

步驟與劑量（耳廓為例）

?配制MC903工作液（避光）；使用前新鮮或短期4℃保存；

?每日在雙耳背側(cè)各點(diǎn)涂1–4 nmol/耳（10–20 μL/耳），連續(xù)7–14天 [1]；

?讀出：耳厚、皮損評(píng)分、TEWL；H&E/甲苯胺藍(lán)；FLG/LOR/IVL、CLDN1/ZO1、TSLP/IL4/IL13（IHC/IF、qPCR、ELISA）；血清總IgE；抓撓行為學(xué) [1–2]。

注意事項(xiàng)：從低劑量起步，7–10天常見穩(wěn)定表型；避免劑量過高致表皮潰破 [1]。

MC903特應(yīng)性皮炎（AD）樣模型造模流程 [1]

3.2 屋塵螨（HDM）經(jīng)皮貼敷模型

原理：變應(yīng)原與蛋白酶活性破壞屏障并致敏，誘導(dǎo)Th2/Th17混合炎癥與IgE [3]。

關(guān)鍵試劑：HDM提取物（Dp/Df），PBS；屏障破壞材料（膠帶或0.5–1% SDS）；可選SEB加重 [3,12–13]。

步驟（背部貼敷）

1. 剃毛并膠帶剝離10–15次或0.5–1% SDS短時(shí)外涂后洗凈 [3]。

2. 紗布片載HDM 100–500 μg/次（約100 μL PBS），半透貼膜固定24–72 h；每周2–3次，連續(xù)2–4周 [3]。

3. 可選：頂端加入SEB 0.1–1 μg/mL短時(shí)暴露以模擬細(xì)菌超抗原加重 [12–13]。

4. 讀出：皮損評(píng)分、TEWL、總/抗HDM特異性IgE；皮膚與引流淋巴結(jié)流式；炎癥與趨化因子譜[3]。

注意事項(xiàng)：不同批次HDM的蛋白酶/內(nèi)毒素差異大，建議先小試確定載量與周期 [3]。

3.3 卵清蛋白（OVA）（abs9203）致敏+表皮激發(fā)模型 [4]

原理：蛋白變應(yīng)原經(jīng)皮致敏與/或系統(tǒng)致敏后激發(fā)，誘導(dǎo)特異性IgE與皮膚炎癥。

兩種路徑

?純表皮致敏：背部膠帶剝離后貼敷OVA 100–500 μg/次（100 μL PBS），持續(xù)1周；間歇1周后重復(fù)2–3輪。

?腹腔致敏+表皮激發(fā)：day 0與7腹腔注射OVA+明礬，day 14起表皮貼敷激發(fā)2–3周。

讀出：皮損評(píng)分、總/OVA特異性IgE/IgG1；組織學(xué)與細(xì)胞因子譜。

注意事項(xiàng)：若特異性IgE不顯著，優(yōu)先采用“腹腔致敏+表皮激發(fā)"路徑。

OVA致敏流程示意圖 [4]

3.4 氧唑酮（OXA）（abs42065081）慢性皮炎模型 [5]

原理：反復(fù)化學(xué)致敏與挑戰(zhàn)，形成慢性苔蘚樣病灶；免疫譜從Th2向Th1/Th17演替。

步驟：1. 致敏：5% OXA（丙酮:橄欖油=4:1）腹部單次外涂。

2. 挑戰(zhàn)：1% OXA（丙酮:橄欖油=4:1）耳或背部，每2–3天一次，共3–5周。

讀出：皮厚、H&E（abs9217）、5（神經(jīng)纖維）（abs159682）、細(xì)胞因子譜（后期IFNγ/IL17A）（abs520007，abs560033，abs520009）。

注意事項(xiàng)：化學(xué)致敏劑需佩戴個(gè)人防護(hù)裝備與通風(fēng)，評(píng)分與采樣盡量盲法與隨機(jī)化。

氧唑酮誘導(dǎo)的 BALB/c 小鼠（10 次挑戰(zhàn)）特應(yīng)性皮炎（AD）樣模型造模流程 [5]

3.6 DNCB誘導(dǎo)AD樣模型 [14]

原理：DNCB（2,4 - 二硝基氯苯）是一種半抗原，其誘導(dǎo) AD 模型的核心機(jī)制是通過皮膚致敏 - 激發(fā)循環(huán)引發(fā) Th2 型免疫應(yīng)答。

步驟：1. 致敏： 1% DNCB 溶液（丙酮：橄欖油 = 3:1），背部涂抹，體積約 20-50 μL，連續(xù) 2-3 天。

2. 挑戰(zhàn)：1% -0.5% DNCB（丙酮:橄欖油=3:1）耳或背部，每周2-3 次，持續(xù) 2-6 周。

讀出：皮厚、H&E（abs9217）、5（神經(jīng)纖維）（abs159682）、細(xì)胞因子譜（后期IFN-γ/IL-17A）（abs520007，abs560033，abs520009）。

DCNB誘導(dǎo)NC/Nga小鼠特應(yīng)性皮炎（AD）樣模型造模流程 [14]

3.7 遺傳/自發(fā)模型概述

Nc/Nga：常規(guī)環(huán)境可自發(fā)AD樣病變，適于長(zhǎng)期慢性與微生物相互作用研究 [6]。

flaky tail（Tmem79/Matt突變，常伴Flg異常）或Flg-/-（abs6112402）：屏障缺陷導(dǎo)致自發(fā)/誘發(fā)性皮炎易感 [7]。

角質(zhì)細(xì)胞TSLP過表達(dá)（K14-TSLP）等條件性模型用于驗(yàn)證表皮—免疫通路因果性 [2]。

說明：遺傳模型表型受微生物與環(huán)境影響顯著，需標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)與屏障條件 [6–7]。

4、人源三維/類器官模型SOP

4.1 重建人表皮/全層皮膚（RHE/FTSE）

原理與組成：原代人角質(zhì)細(xì)胞與成纖維細(xì)胞；膠原I凝膠+Transwell（abs50061，abs50062）；空氣-液界面分化10–14天形成RHE（加成纖維細(xì)胞與凝膠為FTSE）[8]。

AD誘導(dǎo)策略

?細(xì)胞因子：IL-4（abs04698）+IL-13（abs04079）各10–50 ng/mL，處理3–7天；可合并IL-31（abs05989）、TSLP（abs05532）或IL-33（abs06263）[9–10]。

?變應(yīng)原/毒素：頂端給HDM 10–100 μg/mL，或SEB 0.1–1 μg/mL [9–10,12–13]。

?屏障基因操作：siRNA/CRISPR敲低FLG/CLDN1（abs6112402），或使用AD患者來(lái)源角質(zhì)細(xì)胞 [9–10]。

關(guān)鍵讀出：TEER、FITCdextran/Lucifer Yellow通透；分化/緊密連接蛋白（FLG/LOR/IVL、CLDN1/ZO-1）；趨化與報(bào)警素（CCL17/TARC、TSLP等）；轉(zhuǎn)錄組/蛋白組 [8–10]。

注意事項(xiàng)：保持ALI與溫濕度穩(wěn)定，TEER檢測(cè)前平衡，避免溫度漂移 [8]。

4.2 皮膚-on-chip微流控模型 [11]

原理與建模：將RHE/FTSE置入灌流微腔，上腔施加IL-4（abs04698）+IL-13（abs04079）或HDM/SEB刺激，下腔接入免疫細(xì)胞，在線監(jiān)測(cè)TEER/通透與遷移。

適用：透皮藥代、免疫遷移與急慢性切換研究；有利于模擬血流剪切力。

要點(diǎn)：穩(wěn)定流速與供氧，避免氣泡；可串聯(lián)圖像與電學(xué)傳感。

微流控系統(tǒng)及傳輸系統(tǒng)模型 [11]

4.3 hiPSC皮膚類器官 [12]

原理：hiPSC（abs90290）經(jīng)階段性誘導(dǎo)（TGFβ/FGF通路調(diào)控）獲得含表皮真皮毛囊/神經(jīng)成分的皮膚類器官。

AD建模：成熟后處理IL-4（abs04698）/IL-13（abs04079）、HDM、SEB或?qū)隖LG突變，表型化屏障與神經(jīng)-免疫指標(biāo)。

要點(diǎn)：培養(yǎng)周期（周—月）與批間差較大，需嚴(yán)格質(zhì)控與標(biāo)準(zhǔn)化。

皮膚類器官誘導(dǎo)流程 [12]

5、讀出指標(biāo)與檢測(cè)面板

功能/臨床：耳厚/皮厚、皮損評(píng)分、TEWL（動(dòng)物）；TEER、通透性探針（體外）。

組織與成像：H&E（abs9217）、甲苯胺藍(lán)（肥大細(xì)胞）（abs90037）、IF/IHC/mIHC（KRT14/10、FLG/LOR/IVL、CLDN1/ZO-1、TSLP、PGP9.5）（abs50038，abs957）；必要時(shí)共聚焦/光譜拆分掃片儀。

免疫學(xué)：血清總/特異IgE（abs551023，abs552210）；流式（Th2/ILC2/嗜酸粒/肥大細(xì)胞/樹突狀細(xì)胞）；細(xì)胞因子（IL-4/IL-6/IL -8/IL-13/IFNγ/IL-17A等）（abs510017、abs520003；abs510016，abs520012等，詳見下方表格）。

分子與脂質(zhì)：qPCR（abs60086）、RNA-Seq/單細(xì)胞、神經(jīng)酰胺譜。

微生物：金黃色葡萄球菌定植與毒素（SEB）加重評(píng)估（CFU/毒素讀出）。

6、陽(yáng)性藥物對(duì)照 [15]

單抗類藥物：針對(duì)炎癥因子或其受體的拮抗類單克隆抗體藥物，阻斷炎癥因子與其受體結(jié)合，減輕炎癥反應(yīng)（abs190354等）。

JAKi：抑制JAK-STAT信號(hào)通路激活，抑制炎癥因子的產(chǎn)生和作用，從而減輕 AD 的炎癥反應(yīng)和瘙癢癥狀（abs820469等）。

TRPV1 抑制劑：TRPV1 是一種非選擇性陽(yáng)離子通道，在角質(zhì)形成細(xì)胞、肥大細(xì)胞和皮膚感覺神經(jīng)中表達(dá)。以其為靶點(diǎn)的藥物聚焦于阻斷AD 患者的瘙癢信號(hào)傳導(dǎo)（abs813134）。

芳香烴受體調(diào)節(jié)劑：芳香烴受體（AHR）是一種配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，在角質(zhì)形成細(xì)胞、免疫細(xì)胞（如樹突狀細(xì)胞、T 細(xì)胞）中高表達(dá)，參與調(diào)控皮膚屏障功能、免疫平衡及炎癥反應(yīng)。（abs822722）

AD治療的新進(jìn)展 [15]

7、質(zhì)量控制與常見問題排查

模型成型不穩(wěn)：核對(duì)原料批次（MC903/HDM）、屏障破壞強(qiáng)度（膠帶次數(shù)/SDS濃度）、動(dòng)物品系/周齡一致性；適度延長(zhǎng)誘導(dǎo)周期 [1,3]。

IgE不升：優(yōu)化致敏激發(fā)間隔或采用“腹腔致敏+表皮激發(fā)"路徑；或切換至HDM模型 [3–4]。

RHE/FTSE表型弱：提高IL-4/IL-13劑量或延長(zhǎng)處理；合并HDM/SEB或FLG/CLDN1敲低增強(qiáng)表型 [9–10]。

瘙癢行為波動(dòng)大：固定時(shí)段錄像、提高幀率并盲法雙評(píng)；增加樣本量提升統(tǒng)計(jì)功效。

SEB加重導(dǎo)致壞死：降低劑量或縮短暴露，優(yōu)先觀察急性轉(zhuǎn)錄與趨化變化 [12–13]。

8、安全與倫理要點(diǎn)

1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)遵循機(jī)構(gòu)倫理，預(yù)先進(jìn)行樣本量估算、隨機(jī)化與盲法評(píng)分；

2）化學(xué)致敏劑（OXA/DNCB）具刺激/致敏性，DNCB為危險(xiǎn)品，操作需注意佩戴個(gè)人防護(hù)裝備并做好環(huán)境通風(fēng)；

3）體外原代細(xì)胞與人源樣本遵循生物安全與知情同意規(guī)定。

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造模相關(guān)

檢測(cè)相關(guān)

藥物陽(yáng)性對(duì)照