體內巨噬細胞清除實驗的核心是特異性去除巨噬細胞群體，同時最da程度減少對其他免疫細胞和組織的影響，氯膦酸二鈉脂質體（Clodronate Liposomes）清除法是目前特異性最高、應用zui廣泛的體內巨噬細胞清除方法，幾乎不影響中性粒細胞、淋巴細胞等其他細胞。

一、核心原理

氯膦酸二鈉本身難以穿透細胞膜，被包裹進脂質體后，可通過巨噬細胞的吞噬作用被攝入胞內；脂質體在巨噬細胞溶酶體中被降解，釋放出氯膦酸二鈉，抑制細胞內 ATP 合成，最終誘導巨噬細胞凋亡。未被巨噬細胞吞噬的脂質體則會被肝脾代謝，對機體無明顯毒性。

二、操作流程

三、優勢與注意事項

1、優勢

特異性強、毒性低、高活性、高穩定性、使用便捷、支持多種給藥途徑（靜脈/腹腔/皮下/鼻內等）、清除效果可逆（停藥后 2–3 周巨噬細胞可恢復正常水平）。

2、注意事項

• 必須設置空白脂質體對照組，排除脂質體本身對實驗的影響；

• 避免反復高頻注射，否則可能引發輕微炎癥反應；

• 對破骨細胞等巨噬細胞譜系細胞也有清除作用，若實驗關注骨代謝需謹慎使用。

3、使用方法：

具體注射方案可根據自身實驗參考文獻確定和優化，此處提供一種可參考的腹腔注射操作。

① 注射前，將Clodronate Liposomes（abs90559）和PBS Liposomes（abs90560）從冰箱取出，并回溫到室溫，但注意溫度不能超過30°C。

② 將Clodronate Liposomes和PBS Liposomes都上下顛倒8-10次混勻。隨后將26 Gauge針頭裝到1 mL注射器上吸取脂質體。吸取Clodronate Liposomes和PBS Liposomes的注射器不能混用。

注意：Clodronate Liposomes和PBS Liposomes 用前一定要充分混勻，不然可能影響實驗效果。顛倒混勻時需要輕輕混勻，盡量避免起泡沫。

③ 用左手抓住小鼠并固定住小鼠頭部和四肢。隨后將小鼠微微傾斜，讓頭朝向地面，使得集中在腹部的器官向頭部移動，遠離注射位點。

④ 注射前將注射器顛倒6次，再次混勻脂質體。

注意：長時間靜置可能會使脂質體在注射器中沉淀，所以用前需要再次混勻。

⑤ 針頭30度斜插入小鼠腹部右下方，根據實驗分組分別注射Clodronate Liposomes(實驗組)和PBS Liposomes(對照組)，每只小鼠注射200 μL脂質體。

四、文獻應用分享

靶向腫瘤相關巨噬細胞（TAM）的功能研究解決方案

標準化實驗流程體系

1. 動物模型構建

推薦模型：小鼠MC38（C57BL/6背景）或CT26（BALB/c背景）結直腸癌細胞系皮下或腹腔種植模型。

基因工程模型：采用髓系細胞特異性敲除小鼠（如Ccl7 MKO小鼠），用于研究特定基因在巨噬細胞中的功能。

2. 核心干預手段：巨噬細胞清除與靶向調控

氯膦酸鹽脂質體清除法

方案：在腫瘤接種前1天，腹腔注射氯膦酸鹽脂質體（200μL），之后每3天注射一次。

目的：直接驗證巨噬細胞整體在腫瘤生長和免疫治療應答中的必要性。

特異性靶點干預：

CCL7中和抗體：腹腔注射，100μg/次，每3天一次，用于阻斷CCL7功能。

小分子抑制劑（如Bindarit，abs810272）：口服灌胃，5 mg/kg，每3天一次，用于抑制CCL7表達。

聯合治療：與抗PD-L1抗體（200μg，腹腔注射）聯用，評估協同抗腫瘤效果。

3. 多維度評價與驗證體系

關鍵實驗結果解讀

巨噬細胞清除驗證：使用氯膦酸鹽脂質體清除巨噬細胞后，wan全消除了外源性CCL7的促瘤作用，直接證明了CCL7的功能依賴于巨噬細胞的存在。

靶向CCL7的效果：使用中和抗體或抑制劑（Bindarit）靶向CCL7，可抑制腫瘤生長，延長生存期；減少TAM浸潤，并促進其向M1樣表型（iNOS+）轉變；顯著增加腫瘤內具有殺傷功能的CD8+ T細胞（IFN-γ+）浸潤。

聯合治療優勢：抗CCL7與抗PD-L1聯合治療展現出顯著的協同效應，抗腫瘤效果和生存獲益均優于單一療法，為臨床轉化提供了強有力依據。

五、關鍵成功因素總結

脂質體質量：選擇商業化的穩定制劑（如Absin abs90559）

注射技術：確保準確進入目標腔室，避免滲漏

混合均勻：注射前充分混勻脂質體，防止沉淀

驗證步驟：必須通過組織學或流式確認清除效率

對照嚴謹：至少設置PBS和空脂質體雙重對照

時間把握：根據實驗周期設計合理的給藥頻率

參考文獻：
[1] Chen Y, Liu X, Chen J, et al. Macrophage CCL7 promotes resistance to immunotherapy for colorectal cancer by regulating the infiltration of macrophages and CD8+ T cells. J Immunother Cancer. 2025;13(11):e013027. Published 2025 Nov 24. doi:10.1136/jitc-2025-013027

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