文獻標題：Dynamically covalent lipid nanoparticles mediate CRISPR-Cas9 genome editing against choroidal neovascularization in mice

發表期刊：Science Advances（IF 12.5） | DOI：https:/ /w  ww.science.org/doi/10.1126/sciadv.adj0006

使用 Absin 產品：Cas9 mRNA

一、研究思路：精準靶向，破解傳統療法困局

現有 CNV 治療面臨兩大核心難題：一是抗 VEGF 藥物需頻繁注射，易引發眼內高壓、出血等并發癥；二是病毒載體介導的基因編輯存在免疫原性和脫靶風險，非病毒載體則面臨轉染效率低、胞內釋放難等問題。

針對這些痛點，研究團隊提出創新解決方案：

• 1. 構建動態共價脂質體庫：通過 “一鍋法" 合成含亞胺硼酸酯鍵的脂質體，兼具 pH 和 H?O?響應性，實現病變部位精準降解；

• 2. 優化遞送系統：篩選出高效低毒的 LNP-A?B?C?，共遞送 Cas9 mRNA 和 VEGFA 靶向 sgRNA，在病變 RPE 細胞內觸發釋放；

• 3. 簡化給藥方式：采用玻璃體腔注射，通過 Müller 細胞轉胞吞作用穿透視網膜屏障，避免侵入性更強的視網膜下注射。

二、核心研究成果：長效編輯，療效超越臨床藥物

（一）脂質體庫篩選與性能驗證

研究團隊合成了系列含亞胺硼酸酯鍵的脂質體，經高通量篩選發現 LNP-A?B?C?表現最you：

• 轉染效率顯著高于商用轉染試劑 Lpf2k 和 FDA 批準的 LNP-ALC-0315（Fig.2D）；

• 細胞毒性低，在 mRNA 濃度達 5μg/ml 時細胞存活率仍超 80%（fig.S20）；

• 可在 CNV 病變部位高濃度 H?O?觸發下快速降解，釋放 mRNA（Fig.3）。

圖3：酸和H?O?觸發的脂質體降解、LNP解離及mRNA釋放機制圖（原文Fig.3）

（二）體內外基因編輯與治療效果

1. 體外實驗：在 H?O?預處理的 RPE 細胞中，LNP-A?B?C?介導的 VEGFA 基因編輯效率達 70.4%，顯著降低 VEGFA mRNA 和蛋白分泌（Fig.5E、F）；

圖4：體外VEGFA基因編輯效率及表達水平檢測（原文Fig.5）

2. 體內穿透：玻璃體腔注射后，納米粒可通過 Müller 細胞轉胞吞作用到達 RPE 層，48 小時后

仍能檢測到 mRNA 信號（Fig.6A、B）；

圖5：納米粒體內視網膜穿透及分布（原文Fig.6）

3. 治療效果：在激光誘導 CNV 小鼠模型中，單次注射后 VEGFA 基因敲除效率達 57%，CNV 面積減少 76%，療效與臨床藥物阿柏西普相當（Fig.8）；

圖6：CNV小鼠模型體內治療效果評估（原文Fig.8）

4. 長效優勢：二次激光損傷后，該基因編輯方案仍能有效抑制 CNV，而阿柏西普因代謝快未表現出治療效果（Fig.9）。

圖7：二次激光損傷后的長效治療效果（原文Fig.9）

（三）生物安全性優異

LNP-A?B?C?未引發明顯炎癥反應，視網膜組織無病理異常，主要臟器及血液學指標均無毒性表現（fig.S49-S52），解決了傳統載體免疫原性和細胞毒性問題。

圖8：小鼠眼內炎癥因子水平檢測（原文Fig.S49）

圖9：視網膜組織HE染色（原文Fig.S50）

圖10：主要臟器HE染色（原文Fig.S51）

圖11：血液生化和血液學指標檢測（原文Fig.S52）

三、Absin 產品賦能：Cas9 mRNA 成基因編輯核心工具

（一）關鍵產品：Cas9 mRNA（貨號：abs60141）

研究中用于構建 CRISPR-Cas9 編輯系統的核心組件 Cas9 mRNA，由 Absin 提供。該產品具有高純度、高活性、無免疫原性等優勢，可高效翻譯出 Cas9 蛋白，與 sgVEGFA 形成核糖核蛋白復合物（RNP），精準切割 VEGFA 基因靶點。

（二）產品核心作用

1. 作為基因編輯的 “剪刀" 模板：Absin 的 Cas9 mRNA 進入 RPE 細胞后，快速翻譯產生 Cas9 蛋白，與 sgRNA 協同作用，實現 VEGFA 基因的特異性敲除（Fig.1C）；

圖12：CRISPR-Cas9基因編輯機制示意圖（原文Fig.1）

2. 保障編輯效率與安全性：相較于 Cas9 蛋白，mRNA 形式的 Cas9 在細胞內瞬時表達，避免長期存在導致的脫靶風險，且 Absin 產品的高穩定性確保了體內外實驗中基因編輯的高效性（Fig.5E、7B）；

圖13：體外VEGFA基因indel突變分析（原文Fig.5E）

圖14：體內VEGFA基因indel突變分析（原文Fig.7B）

3. 適配遞送系統：與 LNP-A?B?C?載體wan美兼容，在 H?O?響應下釋放后仍保持高活性，最終實現 VEGFA 基因表達下調和 CNV 抑制（Fig.7D、E）。

圖15：體內VEGFA mRNA和蛋白水平檢測（原文Fig.7D、E）

四、總結與展望

該研究通過創新的動態共價脂質體遞送系統，結合 CRISPR-Cas9 基因編輯技術，成功實現了 CNV 的長效治療，為 wAMD 等疾病提供了全新治療策略。Absin 的 Cas9 mRNA 作為核心工具，憑借優異的活性和穩定性，在體內外基因編輯實驗中發揮了關鍵作用，充分驗證了其在基因治療研究中的可靠性。

未來，Absin 將持續深耕生物試劑領域，為基因編輯、核酸遞送等前沿研究提供更優質的產品支持，助力更多疾病治療方案的突破與轉化。

五、相關產品信息

       



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