一、MitoSOX Red 的核心特性是什么?
該探針可自由穿透細胞膜,進入細胞后定向富集于線粒體內部。它僅對超氧化物產生氧化反應,不受其他活性氧、活性氮干擾。氧化后的探針會結合線粒體與細胞核內核酸,釋放穩定的紅色熒光。其熒光檢測存在兩組激發 / 發射參數,396 nm/610 nm 激發模式對線粒體超氧化物檢測選擇性更強,也可采用 510 nm 激發進行常規檢測。試劑以 5 mM DMSO 儲備液形式儲存,-80 ℃可保存 6 個月,-20 ℃建議 1 個月內使用,工作液需現配現用。
二、MitoSOX Red主要適用于哪些研究場景?
MitoSOX Red 核心用途為定量與定位檢測線粒體超氧化物,是氧化應激研究的核心試劑?;跓晒庑盘枏姸?,可直觀反映線粒體活性氧水平,評估線粒體功能狀態。憑借高特異性,它可區分超氧化物與其他氧化物質,規避檢測干擾,適用于活細胞動態觀測與定量分析兩類實驗方向。
氧化應激研究、線粒體功能分析
核心用途:檢測線粒體超氧陰離子水平、評估線粒體膜電位與呼吸鏈活性
三、常規實驗如何使用MitoSOX Red?
1、制備MitoSOX Red染色液
(1)本品以5mM DMSO儲備液的形式提供。建議在開始使用前離心產品,可等分試樣后用氮氣填充管中,并在-20°C或-80°C的避光下儲存。
(2)染料工作液:用合適的緩沖液(如無血清培養基或PBS)稀釋儲備液,制備濃度為1-10μM的MitoSOX Red工作液。
注:請根據實際情況調整優化工作液濃度,現用現配。
2、顯微鏡檢測
MitoSOX Red的最大激發/發射光為396/610nm。MitoSOX Red 染料也可以在 510nm 處激發。如果 MitoSOX Red 染料在 396nm 而不是 510nm 處激發,則該染料可能對標記線粒體超氧化物更具選擇性。
該方法操作簡便、靈敏度高,適配多數細胞生物學基礎實驗。
MitosoX Red → 稀釋配液 → 細胞染色 → 熒光檢測 → 數據分析
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