原理
ECL(EnhancedChemiluminescence,增強型化學發光)發光液的核心原理基于魯米諾(Luminol)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下的氧化反應。在堿性條件下,HRP催化(H?O?)分解產生氧自由基,這些自由基迅速氧化魯米諾陰離子,生成激發態的3-氨基鄰苯二甲酸二陰離子。當其返回基態時,釋放光子(波長約425nm),產生化學發光信號。增強劑的加入顯著放大光信號強度,延長發光時間,使檢測靈敏度提升至皮克(pg)甚至飛克(fg)級別。
性能
超高靈敏度:ECL發光液可檢測低至飛克級的蛋白質或核酸分子,適用于低豐度目標物的分析。
低背景噪音:通過優化緩沖體系和添加特殊抑制劑,有效減少非特異性發光,獲得清晰的蛋白質條帶圖像。
穩定性好:采用避光、低溫包裝,延長保質期;使用過程中對溫度、pH值波動耐受性強,確保實驗結果一致性。
快速發光與長信號持續:加入發光液后1-5分鐘內達到峰值強度,且信號在數小時內保持穩定,便于多次曝光和成像。
應用
ECL發光液廣泛應用于生命科學研究和臨床診斷領域:
蛋白質檢測:作為WesternBlot等實驗的關鍵試劑,用于檢測固定在膜上的特異性蛋白,助力腫瘤標志物研究、神經遞質相關蛋白分析等。
核酸雜交:支持DotBlot、SlotBlot等技術,直接檢測樣品中的核酸分子。
疾病診斷:檢測血液、體液中的微量生物標志物,如腫瘤標志物、自身抗體等,提高診斷靈敏度和準確性。
藥物研發:用于重組蛋白藥物質量控制,檢測雜質蛋白和降解產物,確保產品安全性和有效性。